白细胞介素6/转化生长因子-β信号异常在桥本甲状腺炎辅助性T细胞17/调节性T细胞失衡中的作用研究

摘要：目的 探讨白细胞介素(IL)-6/转化生长因子-β(TGF-β)信号异常在桥本甲状腺炎(HT)辅助性T细胞17(Th17)/调节性T细胞(Treg)失衡中的作用.方法 HT患者38例,健康同年龄对照组32名.酶联免疫吸附试验检测血浆IL-6、TGF-β蛋白水平;荧光定量PCR检测CD4+T细胞视黄酸相关的孤儿受体γt(RORγt)、叉头蛋白P3(FOXP3)、Smad 3、Smad 4、转化生长因子-β诱导的早期反应基因1(TIEG1)、Itch、细胞因子信号抑制物(SOCS)1、SOCS3 mRNA表达;流式细胞术检测外周血CD4+ CD25+FOXP3+T细胞、CD4+IL-17A+T细胞比例及CD4+T细胞表面转化生长因子-β受体Ⅱ(TGF-βRⅡ)、磷酸化的信号转导及转录活化因子3(pSTAT3)蛋白平均荧光强度;甲基化特异性定量PCR检测CD4+T细胞SOCS1基因外显子2、SOCS3基因5'端非翻译区(5'-UTR)3个可能的信号转导及转录活化因子3(STAT3)结合位点CpG岛甲基化水平.采用TGF-β或联合使用IL-6刺激正常人外周血CD4+T细胞72 h后,分析IL-6/TGF-β信号对Th 17/Treg细胞及SOCS1、SOCS3甲基化的影响.结果 (1)HT患者CD4+IL-17A+T细胞比例及转录因子RORγt表达水平显著上调(P＜0.05),CD4+ CD25+ FOXP3+T细胞比例及FOXP3表达明显降低(P＜0.05),Th 17/Treg比值高于正常对照组(P＜0.05).(2)与健康对照组比较,HT患者血浆IL-6浓度及CD4+T细胞pSTAT3表达明显上调(P＜0.05),而TGF-β浓度及CD4+T细胞TGF-βⅡ及Smad 3、Smad4、TIEG1、Itch mRNA表达显著降低(P＜0.05),且IL-6/TGF-β、Th 17/Treg两者的比值呈正相关关系(P＜0.05).(3)HT患者CD4+T细胞SOCS1、SOCS3表达显著增加(P＜0.05),与其Th17/Treg比值呈负相关关系(P＜0.05);正常对照组SOCS1基因外显子2、SOCS3基因5'-UTR区第3个STAT3结合位点的CpG岛完全去甲基化,HT患者呈低甲基化状态(P＜0.05),其去甲基化水平与表达呈正相关关系(P＜0.05).两组SOCS3基因5'-UTR区第1、2个STAT3结合位点CpG岛均处于完全去甲基化状态(P＞0.05).(4)正常人外周血CD4+T细胞经TGF-β刺激后Treg细胞比例显著增高、Th17细胞及Th17/Treg比值均明显低于空白对照组(P＜0.05),而联合使用IL-6和TGF-β刺激后Treg细胞比例显著降低、Th17细胞及Th17/Treg细胞比值明显高于空白对照组(P＜0.05),各组细胞SOCS1基因外显子2、SOCS3基因5'-UTR区3个STAT3结合位点CpG岛均处于完全去甲基化状态(P＞0.05).结论 IL-6/TGF-β信号异常可能是HT患者Th 17/Treg细胞失衡的因素之一.